蛋白印跡�(zhuǎn)移膜的選�
蛋白印跡�(zhuǎn)移(Western Blot)實(shí)�(yàn)中常用的�(zhuǎn)移膜主要是硝酸纖維素膜(Nitrocellulose Blotting Membranes,NC)和PVDF�,此外也有用尼龍�、DEAE纖維素膜�
1、硝酸纖維素膜與PVDF膜特�(diǎn)介紹�
1)硝酸纖維素膜(NC膜)是蛋白印跡實(shí)�(yàn)中使用最廣泛的轉(zhuǎn)移介�(zhì),對(duì)蛋白有很�(qiáng)的結(jié)合能�,且適用于各種顯色方�。NC膜使用簡(jiǎn)便,無需甲醛�(yù)處理,只要在無離子水面浸�(rùn)排出膜內(nèi)氣泡,電泳緩沖液中平衡幾分鐘即可。NC膜容易封�,無需特別�(yán)�(jǐn)?shù)那逑礂l�,轉(zhuǎn)移到NC膜上的蛋白在合適的條件下可以�(wěn)定保存很�(zhǎng)�(shí)��
NC膜越純,其蛋白結(jié)合能力就越高。但純的NC膜比較脆,容易卷,不適合用于需要多次重�(fù)清洗的實(shí)�(yàn)。另外由于NC膜上�(jié)合的蛋白�(huì)因一些去污劑而被代替,在封閉�(shí)最好使用較溫和的Tween20,濃度不超過0.3%�
2)PVDF�
與硝酸纖維素膜相�,PVDF膜在蛋白�(zhì)截留能力、機(jī)械強(qiáng)度和化學(xué)相容性上都擁有更�(yōu)越的性能。做N端蛋白測(cè)序時(shí),在相當(dāng)“�(yán)�”的清洗條件下,當(dāng)尼龍或硝纖膜已經(jīng)降解的情況下,PVDF膜依然保持本色。PVDF膜不適合熒光,同�(shí)PVDF膜需�100%甲醇�(yù)處理再用緩沖液平衡才能使��
2、膜選擇依據(jù)�
1)膜與目的蛋白分子的�(jié)合能力(單位面積的膜能結(jié)合蛋白的載量)以及膜的孔徑(攔截蛋白的大?。?br />
2)保證不影響后續(xù)的顯色檢�(cè)(即適用于所選的顯色方法,信噪比要好��
3)如果后繼實(shí)�(yàn)有其他要求,根據(jù)不同目的來挑選不同的�(zhuǎn)移膜�
3、兩種膜的參�(shù)�(duì)比:
參數(shù)�(xiàng)
|
硝酸纖維素膜�NC)膜
|
PVDF�
|
材料�(zhì)�
|
干的NC膜易�
|
�(jī)械強(qiáng)度高
|
�(jié)合能�
|
80-110 ug/cm2
|
125-200 ug/cm2
|
背景
|
�
|
�
|
溶劑耐受�
|
�
|
�
|
操作程序
|
緩沖液潤(rùn)�,避免氣�
|
使用�100%甲醇�(rùn)�
|
檢測(cè)方式
|
常規(guī)染色,可用放射性和非放射性檢�(cè)
|
常規(guī)染色,可用考馬斯亮�(lán)染色,可用于ECL檢測(cè)、質(zhì)譜分析和快速免疫檢�(cè)
|
適用范圍
|
大于20 KD的大分子蛋白選用0.45 um孔徑膜;小于20 KD選用0.2 um孔徑�;小�7 KD選用0.1 um孔徑�
|
分為0.45 um�0.2 um孔徑,孔徑小的對(duì)小分子蛋白有較好的攔截吸�。主要用于核酸、糖蛋白及蛋白質(zhì)�(cè)�
|
�(jià)�
|
�(jià)格較便宜
|
較貴
|
百靈威可提供一系列�(zhì)量極佳的硝酸纖維素膜和PVDF�,歡迎致�400-666-7788垂詢�
|